Архив
Редакция


Обзоры
Статьи
Обмен опытом
Исторический архив
Новости Минздравсоцразвития России
Новости ГИСКа
Новости ВОЗ
Новости науки
Конгрессы, съезды, конференции
Хроника
Интервью
Некролог

Всероссийская научно-практическая
конференция «Вакцинология-2010»

Главная / Всероссийская научно-практическая конференция «Вакцинология-2010» / Использование технологии высокопроизводительного параллельного определения нуклеотидных последовательностей для мониторинга генетической стабильности живых вирусных вакцин

Использование технологии высокопроизводительного параллельного определения нуклеотидных последовательностей для мониторинга генетической стабильности живых вирусных вакцин


Неверов А.А., Чумаков К.М.
US Food and Drug Administration, Center for Biologics Evaluation and Research, Laboratory of Method Development HFM-470, 1401 Rockville Pike, Rockville, MD 20852

Высокая генетическая изменчивость РНК-содержащих вирусов обуславливает наличие в их популяциях совокупности близких генетических вариантов, часто описываемых термином квазивид (quasispecies). Данный феномен возникает в результате ограниченной точности вирусных РНК-репликаз и обуславливает ряд свойств, важных для выживания вируса. Так, при in-vivo и in-vitro pепликации аттенуированных штаммов, используемых для приготовления живой полиомиелитной вакцины, возможно накоплениe вирулентных вариантов вируса, что приводит к непригодности некоторых серий полиемиелитной вакцины для вакцинации детей. Исходя из этого, для обеспечения безопасности полиомилелитной вакцины необходим строгий контроль ее качества в процессе производства. Помимо традиционных испытаний на животных данная задачa также осуществляется путем прямого анализа на наличие ревертантов в сериях готовой вакцины. Количественный анализ нейровирулентных мутаций в геноме аттенуированных штаммов вируса полиомиелита является частью рекомендованного тестирования готовых серий живой полиомиелитной вакцины. Для проведения данного анализа проводиться ПЦР-амплификация участков генома тестируемого вируса c последующим рестрикциoнным расщеплением продуктов реакции (MAPREC). Несмотря на отличную корреляцию между содержанием мутаций в 5'-нетранслируемой области генома полиовируса (например, 472-C у штаммa Sabin III) и yровнeм остаточной нейровирулентности, определяемой тестированием на обезьянax и трансгенных мышax, метод MAPREC имеет ряд недостатков. Наиболее важным из них является то, что MAPREC позволяет контролировать мутации только в отдельно взятых локусах, оставляя без внимания возможность накопления мутаций в других участках генома. Данные мутации могут существенно влиять на качество контролируемой вакцины и приводить к ложно-негaтивным результатам анализа методом MAPREC. В данной работе нами предложено применение технологии высокопроизводительного параллельного определения нуклеотидных последовательностей для надежного выявления и количественной оценки всей гаммы возможных мутаций в геноме полиовируса. Данный подход позволяет напрямую определять нуклеотидный состав каждой позиции генома анализируемого штамма вируса исходя из результатов анализа нескольких тысяч (или десятков тысяч) индивидуальных вирусных частиц. Анализ серий готовой полиомиелитной вакцины и стандартных образцов, проведенный новым методом, показал отличную корреляцию с результатами тестирования данных образцов методом MAPREC. Определение содержания мутаций в контрольных образцах утверждённых Всемирной Организацией Здравоохранения (ВОЗ) и используемых для калибровки метода MAPREC, проведенное предложенным методом, дало идентичные значения содержания ключевых мутаций. Это позволяет использовать существующие утверждённые ВОЗ стандартные образцы для контроля точности предложенного метода, а сам метод как прямую замену метода MAPREC при проведении разрешающего тестирования серий живой полиомиелитной вакцины для применения на людях. Профили мутаций, присутствующих в вакцинных препаратах в незначительных количествах, были характерны для образцов посевных вирусов, использованных для их производства, и, таким образом, могут быть использованы для определения происхождения партий вакцины. Предложенный метод является универсальным инструментом применимым для слежения за генетической стабильностью любых живых вирусных вакцин.

 статья из журнала № 3 [39] ноябрь 2010


Главная / Всероссийская научно-практическая конференция «Вакцинология-2010» / Использование технологии высокопроизводительного параллельного определения нуклеотидных последовательностей для мониторинга генетической стабильности живых вирусных вакцин


Научно-практический журнал "Биопрепараты"
Адрес редакции: ФГУН "ГИСК им. Л.А.Тарасевича" Минздравсоцразвития РФ, 119002, Москва, пер. Сивцев Вражек, 41.
Журнал зарегистрирован в Комитете РФ по печати ПИ №ФС77-26255 от 24.11.2006 г.

web@medep.ru


Совместный проект «Центр иммунопрофилактики МЕДЭП» и «Гелла-Принт»