Архив
Редакция


Обзоры
Статьи
Обмен опытом
Исторический архив
Новости Минздравсоцразвития России
Новости ГИСКа
Новости ВОЗ
Новости науки
Конгрессы, съезды, конференции
Хроника
Интервью
Некролог

Всероссийская научно-практическая
конференция «Вакцинология-2010»

Главная / Всероссийская научно-практическая конференция «Вакцинология-2010» / Роль протеаиназ крови и их ингибиторов в механизмах противовирусной защиты

Роль протеаиназ крови и их ингибиторов в механизмах противовирусной защиты


Михальчук В.Н., Гоженко А.И., Дивоча В.А.
ГП «Украинский НИИ медицины транспорта

Цель работы. Обосновать и разработать биотехнологию получения противовирусного препарата для человека с класса ингибиторов трипсиноподобных протеиназ по результатам исследований взаимодействия ферментной системы клетки с вирусом гриппа.

Работа посвящена изучению наличия протеолитических ферментов и их ингибиторов в донорской крови человека, в промышленных отходах получения гаммаглобулина, коммерческих отечественных препаратах (иммуноглобулин, интерферон, герпетическая и туляремийная вакцины), в зарубежных препаратах (гриппозные вакцины – «Инфлувак», «Ваксигрип», «Флюарикс», вакцина против гепатита А – «Аваксим»; препараты из крови – «Фраксипарин» и «Солкосерил»). Из промышленных отходов получения гамма-глобулина выделена изоформа ингибитора трипсиноподобных протеиназ, которая обладает защитным действием призаражении экспериментальных животных смертельной дозой вируса гриппа A/PR/8/34 (А/Н1N1).

Наибольшее количество трипсиноподобной протеиназы и ее ингибитора содержалось в свежей донорской крови. Следует отметить, что наибольшая активность протеиназы установлена в донорской крови II-й группы, а активность ингибитора трипсиноподобной протеиназы была наиболее высокой и практически одинаковой в донорской кровь I-й и IV-й групп. Сыворотка донорской крови содержала большее количество ингибитора по сравнению с плазмой и эритроцитарной массой. При длительном хранении активность ингибитора трипсиноподобной протеиназы сохранялась лучше в лиофильно высушенных препаратах, чем в растворенных. Биоматериалом для получения противовирусного препарата для человека служили промышленные отходы получения гамма-глобулина и альбумина, так как наибольшее количество ингибитора трипсиноподобных протеиназ содержалось в отходах первой и второй стадии получения гамма-глобулина, которые идут на утилизацию. Коммерческие отечественные препараты: иммуноглобулин человеческий, интерферон и герпетическая вакцина содержали в своем составе трипсиноподобную протеиназу и ее ингибитор, что свидетельствует об их недостаточной очистке. Гоновакцина не содержала ни протеиназы, ни ее ингибитора, а туляремийная вакцина содержала только следы ингибитора. Иммуноглобулин человека содержал в четыре раза больше ингибитора трипсиноподобных протеиназ, чем интерферон человеческий. Зарубежные гриппозные вакцины «Инфлувак», «Ваксигрип», «Флюарикс»; вакцина против гепатита А – «Аваксим»; препараты из крови – «Фраксипарин» и «Солкосерил» содержали в своем составе трипсиноподобную протеиназу и ее ингибитор. Меньше всего ингибитора и трипсиноподобной протеиназы содержалось в вакцине «Аваксим», а больше всего ингибитора содержалось в препарате «Фраксипарин». Определение активности трипсиноподобной протеиназы и ее ингибитора может служить маркером чистоты препарата при изготовлении вакцин (особенно противогриппозных) и препаратов из крови человека. Методом ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе из отходов I-й и IV-й стадий получения гамма-глобулина промышленным способом было выделено по девять изоформ ингибитора трипсиноподобных протеиназ. Игибиторы трипсиноподобных протеиназ были очищены от балластных белков в среднем на 99,6 %. Наибольший процент выхода ингибитора трипсиноподобных протеиназ установлено к девятой изоформе ингибитора, а удельная активность к четвертой изоформе ингибитора. Выделенные изоформы ингибитора трипсиноподобных протеиназ были гетерогенны по молекулярной массе с преобладанием высокомолекулярных компонентов (480 кДа). В первой, второй и девятой изоформах ингибитора трипсиноподобных протеиназ был обнаружен и белок гаммаглобулина (160 кДа). Пятая изоформа ингибитора трипсиноподобных протеиназ, выделенная из отходов первой стадии получения гамма-глобулина, защитила от смерти 80 % белах мышей, зараженных смертельной дозой вируса гриппа A/PR/8/34 (А/Н1N1). Ингибиторы трипсиноподобных протеиназ, выделенных из отходов четвертой стадии получения гаммаглобулина, не обладали защитными свойствами при экспериментальном гриппе.

На основании результатов проведенных исследований предложено использовать:

  1. Биоматериал для производства ингибитора трипсиноподобных протеиназ в качестве противовирусного препарата для человека.
  2. Способ получения ингибитора трипсиноподобных протеиназ из промышленных отходов получения гамма-глобулина.
  3. Пятую изоформу ингибитора трипсиноподобных протеиназ в качестве противовирусного препарата.
  4. Способ лечения гриппа путем введения ингибитора трипсиноподобных протеиназ.
  5. Способы определения активности трипсиноподобной протеиназы и ее ингибитора в донорской крови человека.
 статья из журнала № 3 [39] ноябрь 2010


Главная / Всероссийская научно-практическая конференция «Вакцинология-2010» / Роль протеаиназ крови и их ингибиторов в механизмах противовирусной защиты


Научно-практический журнал "Биопрепараты"
Адрес редакции: ФГУН "ГИСК им. Л.А.Тарасевича" Минздравсоцразвития РФ, 119002, Москва, пер. Сивцев Вражек, 41.
Журнал зарегистрирован в Комитете РФ по печати ПИ №ФС77-26255 от 24.11.2006 г.

web@medep.ru


Совместный проект «Центр иммунопрофилактики МЕДЭП» и «Гелла-Принт»